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微量凯氏定氮法的测定调整分析

更新时间:2013-03-30      点击次数:2918

凯氏定氮法测定蛋白质含量具有一定的准确度,在物质蛋白含量的测定中运用比较广泛。但凯氏定氮法也存在着一些不足之处,如消化时间长、环境污染大、滴定终点不易控制等。鉴于此,在传统凯氏定氮法的基础上,对试验装置如凯氏定氮仪和操作方法进行一些改进,可以大大提高测定蛋白质的效率,并且降低了测定过程中对空气的污染。

凯氏定氮法的原理如下:总共包括四个步骤消化、蒸馏、吸收和滴定。首先消化过程为将含氮化合物和浓硫酸共热,将有机氮转化为无机氮硫酸铵,具体方程式为2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化剂)。之后就是蒸馏和吸收,将消化完的样品转移到定氮仪蒸馏装置,加入过量的浓氢氧化钠,将NH4+转变成NH3,通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内,硼酸接受氨后,形成四硼酸铵。此过程用公式表示为(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4   2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O。 zui后一步骤为滴定,用标准盐酸滴定,直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。此时反应式为(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3。这样,整个凯氏定氮法的过程,就通过这几个方程式,全部体现出来了。

而对于凯氏定氮法的改进,主要体现在:1.消化装置的组装:将原微量凯氏定氮法需要固定的凯氏烧瓶换成不需要固定的250mL的锥形瓶,同时在瓶口倒置一漏斗,漏斗颈顶部用玻璃弯管连接,弯管再用导管与内盛稀碱溶液的大烧杯相连。2.消化过程:将样品放入锥形瓶中,然后加入浓硫酸,当装置安装完毕后,放在通风橱中,打开电炉,对烧瓶直接加热,进行消化。起初用小火并随时调节火的大小,使产生的烟气被碱液*吸收;待内容物全部炭化,泡沫*停止后加强火力,随时转动烧瓶,使瓶壁上的内容物全部回流入消化液中,烧至溶液透明,沉淀灰白,取下待冷。3.测定过程:在100mL锥形瓶内加入15mL体积分数为1%硼酸吸收液,置于冷凝器下,并使管口浸入硼酸内,夹紧放气口,取10mL样品稀释液或空白液由进样口注入反应室。以5mL蒸馏水冲洗样口,用量筒量取5mL质量分数25%NaOH,迅速倒入进样口,并立即塞好,加水于进样口,以防氨逸出,从第1滴溜液滴下开始计时,蒸馏3min,移动吸收瓶,使硼酸液面离开冷凝管口,再蒸馏1min,然后用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端,从而保证了游离氨被*蒸馏接收。此时我们要确定氨气*被吸收记录下消耗的酸的体积。此时继续夹紧排气口,提起进口塞,使蒸馏水流入反应室,捏紧进气橡皮管,以断绝蒸汽源。这时反应室中的废液被自动吸出,如此反复冲洗干净反应室,将排气阀打开,使反应室外层中的废液排出。

对于凯氏定氮法进行改进后,能提高定氮的效率,同时减少污染,而且操作更加简单。另外,其测定结果跟用全自动定氮仪测出来的结果几乎没有差别。因此,我们在测定蛋白质含量或者氮元素含量的时候,需要慎重选择测定方法,以提高其测定结果度以及测定效率。

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